> Блог > Новости отрасли

Каковы функции набора ELISA?

2022-12-23

Набор ELISA основан на твердой фазе антигена или антитела и ферментативном мечении антигена или антитела. Антиген или антитело, связанные с поверхностью твердого носителя, по-прежнему сохраняют свою иммунологическую активность, а антиген или антитело, меченные ферментом, сохраняют как свою иммунологическую активность, так и ферментативную активность. Во время определения тестируемый образец (в котором измеряется антитело или антиген) реагирует с антигеном или антителом на поверхности твердого носителя. Комплекс антиген-антитело, образованный на твердом носителе, отделяют от других веществ в жидкости промывкой.

Добавляют меченые ферментом антигены или антитела, которые также связываются с твердым носителем посредством реакции. В это время количество фермента в твердой фазе пропорционально количеству вещества в образце. После добавления субстрата ферментативной реакции субстрат катализируется ферментом с образованием окрашенных продуктов. Количество продукта напрямую связано с количеством испытуемого вещества в образце, поэтому можно проводить качественный или количественный анализ в зависимости от глубины цвета.

Высокая каталитическая эффективность ферментов косвенно усиливает результаты иммунного ответа, что делает анализ высокочувствительным. ELISA можно использовать для определения антигенов, но также можно использовать для определения антител.

Основные принципы набора ELISA
Он использует специфическую реакцию антигена и антитела для соединения объекта с ферментом, а затем производит цветовую реакцию между ферментом и субстратом для количественного определения. Объектом измерения может быть антитело или антиген.

В этом методе определения необходимы три реагента:
â Твердофазный антиген или антитело (иммунный адсорбент)
✓ Меченый ферментом антиген или антитело (маркер)
✓ субстрат для ферментативного действия (активатор окраски)

При измерении антиген (антитело) сначала связывается с твердым носителем, но еще сохраняет свою иммунную активность, а затем добавляется конъюгат (маркер) антитела (антигена) и фермента, который еще сохраняет исходную иммунную активность и ферментативную активность. активность. При взаимодействии конъюгата с антигеном (антителом) на твердом носителе добавляется соответствующий субстрат фермента. То есть каталитический гидролиз или окислительно-восстановительная реакция и цвет.

Оттенок цвета, который он дает, пропорционален количеству измеряемого антигена (антитела). Этот окрашенный продукт можно наблюдать невооруженным глазом, с помощью оптического микроскопа, электронного микроскопа, а также можно измерить с помощью спектрофотометра (прибор для ферментной метки). Метод прост, удобен, быстр и специфичен.

Предыдущий:Введение пластины Elisa

Следующий:Почему клеточная культура сначала лизирует эритроциты?